Вектор pKSV-10

Вектор pKSV-10 * вектар pKSV-10 * veсtor pKSV-10 — структура теоретически возможного эукариотического вектора для экспрессии клонированных генов в клетках животных показывает, что эукариотический вектор сохраняет все основные генетические элементы бактериальных векторов. Это, прежде всего, репликатор (область начала репликации ori), распознаваемый репликативными системами эукариотической клетки. В роли репликатора чаще всего используют соответствующие последовательности нуклеотидов вирусов животных (напр., вируса SV40 или вируса Эпштейна-Барр). Особенностью функционирования такого репликатора является потребность в вирусных белках для инициации репликации. Так, в случае SV40 — это Т-антиген, тогда как у вируса Эпштейна-Барр — белок EBNA (Epstein-Barr nuclear antigen). Чтобы репликация векторов, в которых использованы вирусные репликаторы, осуществлялась без вируса-помощника, получили специальные линии клеток, которые стабильно продуцируют соответствующие вирусные белки. Напр., в клетках линии COS синтезируется Т-антиген вируса SV40, а клетки линии HEP-EBNA-2 экспрессируют ген EBNA. В ряде случаев гены, необходимые для репликации эукариотического вектора, вводят непосредственно в вектор. Так же, как и бактериальный, эукариотический вектор должен содержать один или несколько уникальных сайтов рестрикции для клонирования требуемой последовательности нуклеотидов. В экспрессирующем векторе полилинкер располагают непосредственно за генетическими элементами, регулирующими транскрипцию (наибольшее значение из них имеют промотор и энхансер), перед сайтом полиаденилирования и терминатором транскрипции. Большинство эукариотических белков приобретают активную форму только после трансляционных модификаций, характерных для эукариотических клеток (гликозилирование, ацетилирование, фосфорилирование и т. д.). Эукариотические системы экспрессии генов приспособлены для высокопродуктивного синтеза специфичных белков. В них также можно исследовать пути биосинтеза и внутриклеточного транспорта белков, выполнять функциональные анализы белков и их мутантов, изучать эукариотические последовательности, контролирующие уровень экспрессии генов.